簡要描述：以外泌體為代表的細胞外囊泡(EV: Extracellular Vesicles)是由細胞釋放的脂質(zhì)雙分子層微囊泡，內(nèi)含核酸、蛋白和脂質(zhì)等。作為生物體內(nèi)細胞間的通信媒介，外泌體相關(guān)的研究成為免疫、癌癥、神經(jīng)和代謝等多個領(lǐng)域的研究熱點。
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| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一個月 |
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以外泌體為代表的細胞外囊泡(EV: Extracellular Vesicles)是由細胞釋放的脂質(zhì)雙分子層微囊泡，內(nèi)含核酸、蛋白和脂質(zhì)等。作為生物體內(nèi)細胞間的通信媒介，外泌體相關(guān)的研究成為免疫、癌癥、神經(jīng)和代謝等多個領(lǐng)域的研究熱點。
EV的應用領(lǐng)域廣泛，有望應用于治療藥物、生物標志物和藥物遞送系統(tǒng) (DDS)。尤其是間充質(zhì)干細胞(MSC: Mesenchymal stem cell)分泌的EV具有抗炎、抗纖維化和組織修復等作用1），除醫(yī)療領(lǐng)域外，在化妝品和食品等領(lǐng)域也備受關(guān)注。
EV的實際應用需要能夠高效且大規(guī)模分離和純化高純度EV的技術(shù)。富士膠片和光采用與金澤大學醫(yī)學系免疫學的華山教授共同開發(fā)的分離和純化技術(shù)“PS親和法"2），開發(fā)了用于大規(guī)模純化EV的MassivEV™ EV Purification Column PS（MassivEV™ 細胞外囊泡（EV）純化分離柱 PS）。配合使用專用的緩沖液MassivEV™ Purification Buffer Set（MassivEV™ 細胞外囊泡（EV）純化緩沖液套裝），可從支持規(guī)模放大的細胞培養(yǎng)上清中簡易分離和純化EV。
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MassivEV™ EV Purification Column PS | MassivEV™ Purification Buffer Set |
◆產(chǎn)品概要
MassivEV™ EV Purification Column PS和MassivEV™ Purification Buffer Set是用于從大規(guī)格細胞培養(yǎng)上清中分離和純化外泌體等細胞外囊泡（EV）的分離柱和專用緩沖液。采用與EV膜表面的磷酯酰si氨酸（PS）鈣離子依賴性結(jié)合Tim4的“PS親和法"*，可簡易純化高純度EV。
*利用與EV膜成分的磷酯酰si氨酸（PS）特異性結(jié)合Tim4（(T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-containing protein 4)）的純化方法。即利用與PS鈣離子依賴性結(jié)合Tim4的性質(zhì)，在鈣離子存在下，固定在載體上的Tim4可捕獲樣品中的EV。通過清洗去除雜質(zhì)后，加入EV Elution Buffer（螯合劑），低損傷狀態(tài)下從載體上的Tim4的洗脫和純化EV的方法。
◆特點
● 可從大規(guī)格（10 mL至公升級別規(guī)格）細胞培養(yǎng)上清中高效分離和純化高純度EV
● 無需切向流過濾（TFF）系統(tǒng)等昂貴設備 ※只需一個蠕動泵
表1 從200 mL間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)上清中分離和純化EV的對比（富士膠片和光評估）
MassivEV™ | TFF+ AEX※ | TFF+SEC※ | |
可純化的EV | PS陽性EV | 取決于樣品 | 取決于樣品 |
純度 | 高 | 低 | 低 |
純化步驟數(shù) | 1 個步驟 - PS 親和法 | 2 個步驟 - TFF 系統(tǒng) - 陰離子交換色譜法 | 2 個步驟 - TFF 系統(tǒng) - 尺寸排阻色譜法 |
EV粒子產(chǎn)量（參考值） | 1.7x1011 particles | 1.1x1011 particles | 0.7x1011 particles |
純化所需時間 | 8 h | 10 h | 10 h |
※AEX: 陰離子交換色譜法; SEC:尺寸排阻色譜法
<參考> 一只小鼠的EV建議給藥量3-5）：1.0×109 particles/mouse
◆適應性
細胞培養(yǎng)上清（MSC等）：10 mL至公升級別規(guī)格
※ 從10 mL以下的細胞培養(yǎng)上清中分離EV時，請使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2（產(chǎn)品編號：290-84103）
◆處理樣品量
1 mL (產(chǎn)品編號：131-19491) | 5 mL (產(chǎn)品編號：137-19493) | |
樣品量※1 | 200 mL | 1 L |
動態(tài)結(jié)合能力※2 | 5×1011 particles/mL 樹脂 | 2.5×1012 particles/5 mL樹脂 |
※1 MSC細胞培養(yǎng)上清中一次純化可處理的大概樣品量。樣品處理量因細胞培養(yǎng)上清中所含的EV粒子數(shù)而異。處理同一樣品時，可重復使用分離柱，已確認最多可使用五次（初次使用1次、重復使用4次）。
※2 使用MSC來源EV的研究結(jié)果。可能因細胞種類等條件而異。
◆原理
PS親和法利用與EV膜表面的磷酯酰si氨酸（PS）特異性結(jié)合的Tim4，是富士膠片和光開發(fā)的EV分離方法。
PS-Tim4結(jié)合的高特異性配合螯合劑的溫和洗脫，可使EV在完整狀態(tài)下高純度分離。
結(jié)合
| 洗脫
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圖1 MassivEV™ EV Purification Column PS（PS親和法）分離和純化細胞外囊泡的原理 | |
◆實驗方案
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◆數(shù)據(jù)
性能數(shù)據(jù)
與傳統(tǒng)方法對比
在增殖培養(yǎng)基（MSCulture™/ 10% FBS)及EV生產(chǎn)培養(yǎng)基（EV-Up™）中培養(yǎng)骨髓來源的MSC，回收細胞培養(yǎng)上清后，使用0.22 μm過濾器過濾。取200 mL經(jīng)過濾處理的細胞培養(yǎng)上清用作樣品，采用以下4種方法進行分離和純化。純化后的EV溶液分別使用Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)和ELISA進行分析。
<分離方法>
MassivEV™ MassivEV™ EV Purification Column PS / MassivEV™ Purification Buffer Set (本產(chǎn)品, PS親和法)
TFF 僅切向流過濾（500 kDa）
TFF+AEX 切向流過濾（500 kDa）＋陰離子交換色譜法
TFF+SEC 切向流過濾（500 kDa）＋尺寸排阻色譜法
（1）使用NTA 進行粒子分析
MassivEV™
| TFF
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Size Distribution：Mean: 167.5± 0.9 nm Size Distribution：Mode: 150.1 ± 10.8 nm Size Distribution：SD: 43.9 ± 1.2 nm Total Concentration：8.08×1010 ± 2.74×109 particles/mL Total Concentration：29.4 ± 1.0 particles/frame Total Concentration：32.4 ± 1.1 centres/frame | Size Distribution：Mean: 163.6± 2.8 nm Size Distribution：Mode: 128.3 ± 4.2 nm Size Distribution：SD: 63.3 ± 3.3 nm Total Concentration：2.21×1010 ± 1.53×109 particles/mL |
TFF+AEX
| TFF+SEC
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Size Distribution：Mean: 125.7± 2.4 nm Size Distribution：Mode: 92.8 ± 3.2 nm Size Distribution：SD: 55.9 ± 3.3 nm Total Concentration：9.19×109 ± 1.96×108 particles/m | Size Distribution：Mean: 163.9± 6.4 nm Size Distribution：Mode: 154.1 ± 6.0 nm Size Distribution：SD: 60.4 ± 1.0 nm Total Concentration：1.86×1010 ± 1.19×109 particles/mL |
【結(jié)果】
與TFF相比，MassivEV™ 純化得到的粒子數(shù)量少，但與 TFF+AEX 或 TFF+SEC 相比，MassivEV™ 純化得到的粒子數(shù)量更多
（2）使用CD63 ELISA和CD81 ELISA的EV回收率比較（n=3）
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【結(jié)果】
相比傳統(tǒng)方法，使用MassivEV™ 的EV回收率更高。
（3）顆粒蛋白比
蛋白質(zhì)與顆粒的比例可用于指示 EV的純度 6）。收集的EV溶液中總蛋白含量可以用BCA方法測定，顆粒數(shù)可以用NTA測定。然后，比較每 1 μg 蛋白質(zhì)所含有的顆粒數(shù)。
【結(jié)果】
MassivEV方法獲得的每 1 μg 蛋白質(zhì)所含有的顆粒數(shù)是高于傳統(tǒng)方法，也就說明MassivEV方法可以回收純度更高的外泌體。
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| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| 131-19491 | MassivEV™ EV Purification Column PS MassivEV™ 細胞外囊泡（EV）純化分離柱 PS | 1 mL | 基因研究用 | - |
| 137-19493 | MassivEV™ EV Purification Column PS MassivEV™ 細胞外囊泡（EV）純化分離柱 PS | 5 mL | 基因研究用 | - |
| 295-96601 | MassivEV™ Purification Buffer Set MassivEV™ 細胞外囊泡（EV）純化緩沖液套裝 | 1 mL×10次用 (5 mL×2次用) | 基因研究用 | - |
| 以上MassivEV™ EV Purification Column PS、MassivEV™ Purification Buffer Set請配合一同使用 |
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| 132-19345 | MSCulture™ High Growth Basal Medium MSCulture™ High Growth基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 500 mL | 細胞培養(yǎng)用 | - |
| 133-19331 | MSCulture™ High Growth Supplement MSCulture™ High Growth添加劑 | 5 mL | 細胞培養(yǎng)用 | - |
| 以上MSCulture™ High Growth基礎(chǔ)培養(yǎng)基、MSCulture™ High Growth添加劑請配合一同使用 |
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| 053-09451 | EV-Up™ EV Production Basal Medium for MSC, AF EV-Up™ 間充質(zhì)干細胞外泌體生產(chǎn)用基礎(chǔ)培養(yǎng)基，無動物源成分 | 95 mL | 細胞培養(yǎng)用 | - |
| 298-84001 | EV-Up™ MSC EV Production Supplement, AF EV-Up™ 間充質(zhì)干細胞外泌體生產(chǎn)用添加劑，無動物源成分 | 100 mL用 | 細胞培養(yǎng)用 | - |
| 以上EV-Up™基礎(chǔ)培養(yǎng)基、EV-Up™添加劑請配合一同使用 |
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| 294-84101 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™外泌體提取試劑盒PS Ver.2 | 2 tests | 基因研究用 | - |
| 290-84103 | MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2 MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS Ver.2 | 10 tests | 基因研究用 | - |
| 適用于從10 mL以下的細胞培養(yǎng)上清和體液樣品中分離和純化EV |
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